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1、原理及适用范围
将乳糖胆盐选择性培养基和TTC显色剂加载在纸片上，经培养后能够在纸片上生长并发酵乳糖产酸的即为大肠菌群阳性，记录每个稀释度大肠菌群阳性纸片数，根据大肠菌群MPN表查出相应的大肠菌群数。 食品大肠菌群检验纸片法与国标法中的九管法相对应，将原来几步的试验简化为一步，时间由78h缩短为24h以内，省去了制备培养基、消毒和培养器皿的清洗处理等大量辅助性工作，随时可以打开包装进行抽样检测。 执行标准：食品安全国家标准 食品微生物检验大肠菌群计数MPN计数法（GB 4789.3）。
适用于各类食品、饮料等样品中大肠菌群的快速测定。
2、操作方法
2.1、样品处理：按无菌操作称取样品25g（或25mL）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样瓶或均质杯中，经充分振摇做成1：10的样品匀液。样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时用1mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸调节。用1mL灭菌吸管吸取1：10样品匀液，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇试管制成1：100的样品匀液。根据对样品污染状况的估计，按上述操作，一次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换一支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。
2.2、接种
2.2.1、选取两个稀释度进行接种，普通食品一般采用1：10和1：100这两个稀释度，饮料采用原液和1：10两个稀释度。本品每份由三片大纸片（接10mL，袋中二片叠放算作一大片），六片小纸片（接1mL）组成。
2.2.2、用灭菌吸管吸取10mL 1：10样品匀液加到含有大纸片的塑料袋中（相当于接样品1g），吸透后平放，做三个重复。再用1mL灭菌吸管吸取1mL同一稀释度的样品匀液加到含有小纸片的塑料袋中（相当于接样品0.1g），做三个重复。再另取一支1mL灭菌吸管吸取1mL 1：100样品匀液加到含有小纸片的塑料袋中（相当于接样品0.01g），做三个重复。
2.3、培养：将接种好的纸片（可叠放）放入36℃±1℃培养箱中培养15～24h。
3、大肠菌群可能数（MPN）的报告
3.1 若纸片变黄或在黄色背景上呈现红色斑点为大肠菌群阳性纸片。纸片保持紫蓝色不变或在紫蓝色背景上呈现红色斑点，但周围没有黄色均为大肠菌群阴性纸片。
3.2 记录每个稀释度大肠菌群阳性纸片数，根据《食品饮料大肠菌群MPN表》查出相应的大肠菌群数。
3.3 如接种的个梯度为原液，应将表上查出的结果除以10。
4、注意事项
新的国家标准所用的单位改为每克（或毫升）检样中大肠菌群可能数，标准的接种量为0.333g（mL），MPN表也是由此而设计。而使用本品的标准接种量为3.33g（mL），大纸片接种10mL 1：10样品匀液相当于1g样品，因而表内数字应相应降低10倍。饮料样品的接种量为33.3mL，大纸片接种10mL样品原液，表内数字应降低100倍。
5、保存条件
本产品需存放在4℃～10℃冰箱中，保质期为一年，铝箔袋打开后,未用完的纸片要放回铝箔袋中封好，放到冰箱中，一个月内用完。在高湿度的环境中可能出现冷凝水，在拆封前将整包回温至室温。
食品、饮料大肠菌群（MPN）检索表
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阳性纸片数
|
MPN
|
95%可信限
|
阳性纸片数
|
MPN
|
95%可信限
|
||||||
|
0.10
|
0.01
|
0.001
|
下限
|
上限
|
0.10
|
0.01
|
0.001
|
下限
|
上限
|
||
|
0
0
0
0
|
0
0
1
1
|
0
1
0
1
|
＜3.0
3.0
3.0
6.1
|
－
0.15
0.15
1.2
|
9.5
9.6
11
18
|
2
2
2
2
|
2
2
2
3
|
0
1
2
0
|
21
28
35
29
|
4.5
8.7
8.7
8.7
|
42
94
94
94
|
|
0
0
1
1
|
2
3
0
0
|
0
0
0
1
|
6.2
9.4
3.6
7.2
|
1.2
3.6
0.17
1.3
|
18
38
18
18
|
2
3
3
3
|
3
0
0
0
|
1
0
1
2
|
36
23
38
64
|
8.7
4.6
8.7
17
|
94
94
110
180
|
|
1
1
1
1
|
0
1
1
2
|
2
0
1
0
|
11
7.4
11
11
|
3.6
1.3
3.6
3.6
|
38
20
38
42
|
3
3
3
3
|
1
1
1
1
|
0
1
2
3
|
43
75
120
160
|
9
17
37
40
|
180
200
420
420
|
|
1
1
2
2
|
2
3
0
0
|
1
0
0
1
|
15
16
9.2
14
|
4.5
4.5
1.4
3.6
|
42
42
38
42
|
3
3
3
3
|
2
2
2
2
|
0
1
2
3
|
93
150
210
290
|
18
37
40
90
|
420
420
430
1000
|
|
2
2
2
2
|
0
1
1
1
|
2
0
1
2
|
20
15
20
27
|
4.5
3.7
4.5
8.7
|
42
42
42
94
|
3
3
3
3
|
3
3
3
3
|
0
1
2
3
|
240
460
1100
＜1100
|
42
90
180
420
|
1000
2000
4100
－
|
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注1：本表采用3个稀释度〔0.1g(或0.1ml)、0.01g（或0.01ml）、和0.001g（或0.001ml）〕，每个稀释度接种3片。
注2：表内所列检样量如改用1g(或1ml)、0.1g（或0.1ml）、和0.01g（或0.01ml）时，表内数字应相应降低10倍；如改用0.01g(或0.01ml)、0.001g（或0.001ml）、和0.0001g（或0.0001ml）时，则表内数字应相应增高10倍，其余类推。
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